豬圓環(huán)病毒抗體elisa檢測試劑盒

豬圓環(huán)病毒抗體elisa檢測試劑盒

豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus ,PCV)是近年來新發(fā)現(xiàn)的引起仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥的必需病原。PCV2具有致病性，主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥，還可引起豬皮炎和腎病綜合癥、間質(zhì)性肺炎和繁殖障礙等。主要感染斷奶仔豬，以發(fā)熱、漸進(jìn)性消瘦、呼吸困難和黃疸等癥狀為特征，死亡率5％－30％，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。檢測特異性豬圓環(huán)病毒抗體，可作為豬場圓環(huán)病疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標(biāo)。

【試劑組成】

 本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中特異性抗圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體。本試劑靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【操作程序】

1．洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號液)按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2． 樣本稀釋 用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應(yīng) 每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4．加酶反應(yīng) 除空白對照孔外，每孔加酶結(jié)合物(1號液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應(yīng) 加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴，終止反應(yīng)(加終止液后，藍(lán)色會變?yōu)辄S色)并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。

以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(A值)。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。

【注意事項】

1.試劑盒于2-8℃保存，有效期6個月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時用不干膠膜封蓋板孔。

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